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http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/2449| Población de receptores P2X en macrófagos de humano | |
| EYDIE MARIELA VARGAS MARTINEZ | |
| ANA MARIA ESTRADA SANCHEZ Raquel Guerrero Alba | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| Macrófagos de humano P2X1 P2X4 P2X7 | |
| "Los receptores P2X se expresan en distintos tejidos y están involucrados en diferentes funciones fisiológicas. En los macrófagos de humanos, la presencia de los receptores P2X1, P2X4 y P2X7 ha sido demostrada. Sin embargo, sus propiedades farmacológicas y sus funciones son poco conocidas y controversiales. Por tal motivo, el objetivo de este estudio es examinar la expresión de las subunidades P2X1, P2X4, P2X7 y P2X1del una variante de “splicing” del P2X1 encontrada en monocitos, así como, caracterizar la respuesta de los receptores P2X nativos en macrófagos derivados de monocitos periféricos humanos (MDM). Utilizando la técnica de PCR en célula única se demostró la presencia de ARNm de la subunidad P2X1, P2X1del, P2X4 y P2X7 en el 40 %, 5 %, 20 % y 90 % de los macrófagos. De los cuales, el 25 % co-expresaron el ARNm de las subunidades P2X7 y P2X1; el 5 % P2X7 y P2X4; y el 15 % co-expresaron el ARNm de las subunidades P2X7, P2X4 y P2X1. Mediante la técnica de patch-clamp en su configuración de célula completa, la aplicación de 0.01 mM ATP provocó corrientes entrantes de activación rápida y dos cinéticas de desensibilización diferentes. La primera mostró una desensibilización rápida inhibida por 1 M de PPADS que asemeja a las propiedades del receptor P2X1. La segunda mostró una corriente de desensibilización lenta, insensible a PPADS, pero potenciada con 3 M de ivermectina similar a las propiedades reportadas para el receptor P2X4. La aplicación de una concentración alta de ATP (5 mM) indujo tres tipos de corrientes, la primera de activación lenta no-desensibilizante, similar a la reportada para el receptor P2X7 en el 69 % de los macrófagos de humanos e inhibida por 0.1 M de A-804598; el segundo tipo de corriente mostró una activación y desensibilización rápida, presente en el 15 % de las células; y el tercer tipo fue una corriente de activación rápida con una desensibilización bifásica observada en el 15 % de los macrófagos. Tanto la cinética de desensibilización rápida como la bifásica fueron muy similares a la observada para el receptor P2X1 humano recombinante expresado en ovocitos de Xenopus laevis. Estos datos demuestran por primera vez la co-expresión del ARNm y la presencia de receptores funcionales de las subunidades P2X1, P2X4, y P2X7 en macrófagos de humanos." "Population of P2X receptors on human macrophages P2X receptors are expressed in different tissues and are involved in different physiological functions. In human macrophages, the presence of the P2X1, P2X4 and P2X7 receptors has been demonstrated. However, its pharmacological properties and functions are poorly understood and controversial. For this reason, the objective of this study is to examine the expression of the P2X1, P2X4, P2X7 and P2X1 subunits of a variant of P2X1 “splicing” found in monocytes, as well as to characterize the response of native P2X receptors in macrophages derived from peripheral monocytes. humans (MDM). Using the single cell PCR technique, the presence of P2X1, P2X1del, P2X4 and P2X7 subunit mRNA was demonstrated in 40 %, 5 %, 20 % and 90 % of macrophages. Of which, 25 % co-expressed the mRNA of the P2X7 and P2X1 subunits; 5 % P2X7 and P2X4; and 15 % co-expressed the mRNA of the P2X7, P2X4 and P2X1 subunits. Using the patch-clamp technique in its whole cell configuration, the application of 0.01mM ATP elicited fast-activating inward currents and two different desensitization kinetics. The first showed rapid desensitization inhibited by 1 µM PPADS that resembles the properties of the P2X1 receptor. The second showed a slow desensitization current, insensitive to PPADS, but enhanced with 3 µM of ivermectin like the properties reported for the P2X4 receptor. The application of a high concentration of ATP (5 mM) induced three types of currents, the first one of slow non-desensitizing activation, similar to that reported for the P2X7 receptor in 69 % of human macrophages and inhibited by 0.1 µM. from A-804598; the second type of current showed rapid activation and desensitization, present in 15 % of the cells; and the third type was a fast activating current with biphasic desensitization observed in 15 % of macrophages. Both the rapid and biphasic desensitization kinetics were similar to that observed for the recombinant human P2X1 receptor expressed in Xenopus laevis oocytes. These data demonstrate for the first time the co-expression of mRNA and the presence of functional receptors for the P2X1, P2X4, and P2X7 subunits in human macrophages." | |
| 25-11-2020 | |
| Tesis de doctorado | |
| BIOLOGÍA MOLECULAR | |
| Aparece en las colecciones: | Publicaciones Científicas Biología Molecular |
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