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http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/725| Trasformación nuclear y de cloroplastos de sistemas vegetales con genes sintéticos antimicrobianos | |
| ARELI HERRERA DIAZ | |
| ANGEL GABRIEL ALPUCHE SOLIS | |
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| Cloroplastos | |
| "Las enfermedades infecciosas son una de las principales causas de mortalidad a nivel mundial. El uso indiscriminado de antibióticos para combatir estas enfermedades ha provocado que los microorganismos desarrollen resistencia a una gran cantidad de antibióticos, motivo por el cual es necesario contar con nuevas estrategias para combatirlos. En este contexto, los péptidos antimicrobianos son una alternativa eficaz para combatir un gran número de microorganismos. El uso de plantas transgénicas para la producción de proteínas de importancia farmacéutica es una excelente alternativa biotecnológica. Dentro del área de la transformación genética de plantas, en los últimos diez años fue posible introducir genes al genoma del cloroplasto. Esta tecnología emergente cuenta con ventajas respecto a la transformación nuclear tales como: ausencia de flujo de transgenes mediante polen; altos niveles de expresión de proteína heteróloga (hasta 20% de la proteína total soluble); y no se conocen efectos epigenéticos. Particularmente en el caso de los péptidos antimicrobianos se han reportado buenos resultados de plantas transgénicas con genes sintéticos que confieren resistencia contra bacterias y hongos. En base a lo anterior, el objetivo del presente proyecto es la generación de plantas transgénicas y transplastómicas que expresen péptidos antimicrobianos de Protegrina (PG) de cerdo. Con respecto a la transformación nuclear se diseñó un gen sintético de PG1 optimizado para expresión en sistemas vegetales, fusionado al péptido señal de la proteína antifúngica 2 de rábano (Rs- AFP2); se clonó este gen en vectores binarios pCAMBIA1304 y 2201, bajo el promotor constitutivo CaMV35S y el terminador NOS. Los vectores fueron introducidos en Agrobacterium tumefaciens y mediante co-cultivo se transformaron nuclearmente los sistemas vegetales de tomate, lechuga y zanahoria. Se obtuvieron callos embriogénicos de zanahoria, y explantes y callos de tomate después de 6 meses en medio de cultivo de selección, así como 20 líneas de plantas adultas de lechuga, de las cuales cinco dieron resultados positivos para el transgén PG1 por técnicas de PCR. Se demostró la actividad antimicrobiana de callos de lechuga contra Escherichia coli y Listeria monocytogenes. Con el objetivo de lograr la transformación de cloroplastos de tabaco, se empleó el vector pKCZ en el que se clonaron el Promotor Prrn, la región 5’UTR de la proteína 10 del fago T7." "Infectious diseases are one of the main causes of mortality worldwide. The irrational use of antibiotics to face these diseases has lead to the developing of resistance strategy in microorganisms against a broad range of antibiotics, therefore is necessary to have new approaches to control them. In this regard, the antimicrobial peptides are an effective alternative to control a wide number of microorganisms. The use of transgenic plants for protein production of pharmaceutical importance is an excellent biotechnological option. Within the plant genetic transformation area, in the last 10 years was possible to introduce genes into the chloroplast genome. This emergent technology has advantages in comparison to the nuclear transformation such as: transgene flow by pollen is avoided; high expression levels of heterologous protein (up to 20% of total soluble protein); no epigenetic effects are known. Particularly in antimicrobial peptides, good results have been reported in transgenic plants harboring synthetic genes which confer resistance to bacteria and fungi. Based on the information above mentioned, the objective of the current work is the production of transgenic and transplastomic plants expressing protegrin (PG) antimicrobial peptides from pig. In the nuclear transformation process a PG1 synthetic gene optimized for plant expression was designed. This gene was fused to the signal peptide of the anti-fungi protein 2 of radish (Rs-AFP2); the gene was cloned in binary vectors pCAMBIA 1304 and 2201, driven by the constitutive promoter CaMV35S and the NOS terminator. The vectos were introduced in Agrobacterium tumefaciens and the nuclear transformation of the tomato, carrot and lettuce plant systems transformation was performed through co-cultivation. Carrot embryogenic calli were obtained and also tomato calli after 6 months under selection culture media. Additionally 15 lettuce adult plant lines we obtained, from these, five were positive for PG1 using PCR analysis. It was demonstrated the antimicrobial activity of the lettuce calli against Escherichia coli and Lysteria monocytogenes. To achieve the tobacco chloroplast transformation, the pKCZ vector was employed where the Prrn promoter and the 5’UTR region of protein 10 from T7 phage were cloned. The protegrin genes (PG1, PG3cc and PGIB367) were added to this vector fused to ubiquitin and showed to be functional through the ubiquitin immunodetection." | |
| 2005-12 | |
| Tesis de maestría | |
| Español | |
| Público en general | |
| BIOLOGÍA MOLECULAR | |
| Aparece en las colecciones: | Publicaciones Científicas Biología Molecular |
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