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http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/841| Basis of the hyperexcitability of nociceptive neurons induced by activation of protease- activated receptor-2 | |
| FRANCISCO BAUTISTA CRUZ | |
| CARLOS BARAJAS LOPEZ | |
| Acceso Abierto | |
| Atribución-NoComercial-SinDerivadas | |
| Neuronas nociceptivas Patch Clamp Receptores PAR2 | |
| "Las proteasas liberadas durante procesos inflamatorios cortan una porción del segmento extracelular de los Receptores Activados por Proteasas 2 ( PAR2) y la porción distal del receptor puede entonces autoactivarse. Las fibras neuronales del ganglio de la raiz dorsal (DRG) que inervan el intestino expresan PAR2 y su activación durante procesos inflamatorios es reconocido como causa de hiperalgesia visceral. En la primera serie de experimentos analizamos algunos de los mecanismos que participan en la hiperexcitabilidad inducida por los PAR2 en neuronas del DRG de ratón. Para identificar a las neuronas que inervan el colon, inyectamos en su pared Fast Blue, substancia que es absorbida por las fibras nerviosas y transportada a través del axón hasta el soma neuronal. Realizamos registros del potencial de membrana utilizando la técnica Patch Clamp en su configuracion de célula completa de neuronas del DRG cuidadosamente disociadas. La activacion de los PAR2 mediante la aplicación de SLIGRL-NH2 o tripsina durante 2 min, generaron una despolarización neuronal sostenida, la cual ocurrió concomitantemente con un incremento en la resistencia de entrada y una marcada reducción en la reobase. Lo cual reveló un incremento en la excitabilidad neuronal. En registros con fijación de voltaje, la aplicación de SLIGRL-NH2 suprimió las corrientes de potasio de rectificación tardia (IK), pero no tuvo efecto sobre las corrientes de potasio de activación y desactivación rápida (IA), y sobre la corriente de sodio resistente a la TTX. El incremento en la excitabilidad neuronal inducida por la activación de los PAR2, fue bloqueado por el inhibidor de la PKC (Calfostina C) y el inhibidor de las cinasas reguladas por señalización extracelular 1 y ERK1/2 (PD98059). En conclusión, la activación de los receptores de los PAR2 en neuronas nociceptoras del colon causan hiperexcitabilidad que es mediada por supresión de canales IK y este efecto es mediado por las cinasas de proteinas (PK) C y ERK1/2. Estos estudios describen un mecanismo novedoso de sensibilización de las neuronas nociceptoras del colon que puede estar implicado en condiciones de hiperalgesia viceral como el síndrome del colon irritable. En una segunda serie de experimentos, realizados en HEK cells, demostramos que la activación de los PAR2, también sensibiliza los receptores TRPV1 a través de la activación de las PKCE y PKA." "Proteases released during inflammation cleave a portion of the external segment of the Protease-Activated Receptors-2 (PAR2) and the distal portion of the receptor can then activate itself. The neuronal fibers of dorsal root ganglia (DRG) that innervate the intestine express PAR2 and its activation has been related with visceral hyperalgesia. In the first set of experiments, we analized some mechanisms underlying PAR2-evoked hyperexcitability of mouse colonic DRG neurons. To identify DRG neurons that inervate the colon we injected Fast Blue and DiI retrograde tracers into the mouse colon. We later used epi-fluorescence, to identify DiI-labelled neurons. Whole-cell current-clamp recordings of acutely dissociated neurons demonstrated that PAR2 activation with a brief application (2 min) of PAR2 agonists (SLIGRL-NH2 and trypsin) evoked sustained membrane depolarizations, which occurred concomitantly to an increased in input membrane resistance and a marked reduction in rheobase. In voltage clamp, SLIGRL-NH2 markedly suppressed delayed rectifier IK currents, but had no effect on the transient IA current or TTX-resistant sodium currents. The hyperexcitability induced by PAR2 activation was blocked with Calphostin C (a PKC inhibitor), and PD98059 (a ERK1/2 inhibitor). Our conclusion is that activation of PAR2 receptors on colonic nociceptive neurons causes hyperexcitability that is mediated by suppression of delayed rectifier IK currents. Both PKC and ERK1/2 mediate this hyperexcitability. These studies describe a novel mechanism of sensitization of colonic nociceptive neurons that may be implicated in conditions of visceral hyperalgesia such as irritable bowel syndrome. In a second set of experiments, carried out in HEK cells, activation of PAR2 sensitizes TRPV1 currents by a PKCE and PKA-dependent mechanism. Activation of these receptors also potentiates TRPV4-mediated currents, effect that appears to require PKC and PKA activity." | |
| 2007-08 | |
| Tesis de doctorado | |
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| BIOLOGÍA MOLECULAR | |
| Aparece en las colecciones: | Publicaciones Científicas Biología Molecular |
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